冷室、組織塊、包埋劑、切片刀之間的溫度平衡于優(yōu)化的切片溫度(optimum cutting temperature, OCT)附近，是獲得高質(zhì)量冰凍切片的保證。
 

　　不同的組織因構(gòu)成和脂質(zhì)各異而具有不同的OCT溫度。冰凍組織在接觸刀刃的瞬間，局部溫度短暫升高發(fā)生局部融化;隨后切開的組織薄片暴露于冷室被再次驟冷冰凍。
 

　　這種融化-冰凍溫度變化是切片皺褶或斷裂的內(nèi)在原因，在此基礎(chǔ)上切片的軟硬度和厚薄度進(jìn)一步影響皺褶產(chǎn)生。在切片過程中，冰凍包埋劑也須歷經(jīng)與組織類似的溫度變化，這就要求包埋劑必須具有與組織塊相近的冰凍速度和軟硬韌度。
 

　　OCT冰凍切片包埋劑是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，目前已廣泛用于免疫組化實(shí)驗(yàn)室中，其用途是在冰凍切片時(shí)支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。又因OCT混合物為水溶性，故在漂片時(shí)可溶于水，所以在以后的染色中不會(huì)增加背景染色。
 

　　利用OCT混合物(opti-mum cutting temperature compound)預(yù)先浸潤(rùn)組織，然后再進(jìn)行恒冷箱切片，使切片質(zhì)量得到改善。
 

　　OCT包埋劑(SAKURA產(chǎn)品，MADE IN USA)包埋流程:
 

　　1. 將放在蔗糖溶液中的組織塊取出，放入20g L-1 蔗糖與OCT包埋劑1：1體積比例混合液中，室溫浸泡2h
 

　　2. 移入OCT包埋劑中室溫浸泡4h，更換新的OCT包埋劑，室溫浸泡6h.
 

　　3. 將標(biāo)本置于托物臺(tái)，用恒冷箱切片機(jī)切片(一般-22℃)，片厚10μm，貼于預(yù)處理的載玻片上，-20℃冰箱保存。