Calcein, AM是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如 BCECF, AM和CFDA）相比，Calcein, AM的細(xì)胞毒性很低。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為 490 nm和515 nm。
      Calcein, AM僅對(duì)活細(xì)胞染色。作為核染色染料的PI 不能穿過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過(guò)死細(xì)胞膜的無(wú)序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的 DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（激發(fā)：535 nm，發(fā)射：617 nm），因此 PI 僅對(duì)死細(xì)胞染色。由于 Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn)，Calcein, AM和PI 經(jīng)常被結(jié)合用來(lái)作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。 
      由于不同細(xì)胞系的最佳染色條件不同，我們建議個(gè)別確定Calcein, AM 和PI的合適濃度。  
操作說(shuō)明：
     （1）用DMSO 制備1 mM 的Calcein, AM溶液，并用PBS 將其稀釋制成1～50μM的Calcein, AM溶液①。
     （2）將1/10 細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Calcein, AM溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中②。
     （3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞15～30分鐘。 
     （4）用PBS 或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次。 
     （5）用490 nm激發(fā)波長(zhǎng)，515 nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。 
注意：

      如果Calcein, AM很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，如Pluronic F127 。 
      也可以用1/10 濃度的Calcein, AM溶液代替培養(yǎng)基。